Амилаза определение в биологических жидкостях диагностическое значение

Персональный сайт – Альфа-амилаза

Амилаза определение в биологических жидкостях диагностическое значение

Амилаза

Альфа-амилаза (диастаза, альфа-1,4-глюкан-4-глюканогидролаза) относится к классу гидролаз, катализирующих гидролиз полисахаридов, включая крахмал и гликоген, до декстринов и простых ди- и моносахаридов (мальтоза, глюкоза).

Амилаза в самых больших концентрациях находится в поджелудочной железе и слюнных железах соответственно – в форме поджелудочного и слюнного изоферментов. В физиологических условиях амилаза сыворотки крови состоит на 40% из панкреатической амилазы и на 60% из слюнной амилазы.

Используя специфические ингибиторы или разделение электрофорезом, можно установить происхождение фермента, присутствующего в плазме. Амилаза удаляется из плазмы почками и экскретируется с мочой. Это обуславливает большую информативность определения активности альфа-амилазы в моче как теста оценки функционального состояния поджелудочной железы.

Рост активности амилазы имеет самое большое значение при диагностике заболеваний поджелудочной железы.

Клинико-диагностическое значение:

Активность альфы-амилазы крови и мочи в течение суток значительно меняется.

Гиперамилаземия – повышение активности амилазы в сыворотки крови.

Ø Острый панкреатит – максимальные значения имеют место в первые 6 – 12 часов после проявления симптомов болезни. После этого времени активность фермента снижается, нормализуется через 2 – 5дней. Если активность сохраняется увеличенной более 5 дней, это свидетельствует о увеличении воспаления.

Ø Обострение при хроническом панкреатите

Ø Перфорация язвы двенадцатиперстной кишки

Ø Кишечная непроходимость

Ø Холецистит

Ø Перитонит

Ø Острый аппендицит

Ø Паротит

Ø Алкалоиды (морфин, героин, кодеин)

Ø Отравление метанолом

Ø Большие дозы этанола (у алкоголиков)

Гипоамилаземия – снижение активности амилазы в сыворотки крови (практически не имеет диагностического значения).

Ø Некроз поджелудочной железы

Ø Тиреотоксикоз

Ø Инфаркт миокарда

Гиперамилазурия – повышенное выделение амилазы с мочой.

Ø Острый панкреатит – повышение активности фермента наблюдается в течение первых 24 часа воспаления. Повышенное выделение фермента с мочой сохраняется в последующие 7 -10 дней, несмотря на то, что активность амилазы в крови уже после 3 – 4дней нормальная.

Ø Рак поджелудочной железы

Ø Перфорация язвы двенадцатиперстной кишки

Ø Желчекаменная болезнь

Ø Болезни слюнных желез, паротит, камни в слюнных протоках

Гипоамилазурия – снижение выделения амилазы с мочой.

Ø Болезни почек

Ø Болезни печени

«Определение активности альфы-амилазы в биологических жидкостях унифицированным методом Каравея»

Принцип: под действием альфы-амилазы крахмал гидролизуется с образованием продуктов, не дающих цветной реакции с йодом. Интенсивность уменьшения окраски йод-крахмального комплекса в единицу времени пропорциональна активности фермента.

Исследуемый материал: свежая сыворотка крови, моча.

Состав набора:

Реагент №1 – буфер

Реагент №2 – концентрированный субстрат

Реагент №3 – концентрированный раствор йода

Реагент №4 – раствор фторида калия

Реагент №5 – кислота соляная

Подготовка реагентов к процедуре анализа:

Рабочий раствор субстрата: смешать реагенты №1 и №2 в соотношение 24:1.

Рабочий раствор йода: смешать дистиллированную воду, реагент №3 и реагент №4 в соотношении 7:1:2.

Рабочий раствор соляной кислоты: развести содержимое флакона №5 дистиллированной водой в 16 раз.

Ход определения:

РеактивОпытная пробаКонтрольная проба
Субстрат500 мкл500 мкл
Водяная баня (370С) 5 минут
Образец (сыворотка, моча)0,01 мкл
Перемешать и инкубировать при 370С в течение 5 минут
Соляная кислота4,0 мл4,0 мл
Образец (сыворотка, моча)0,01 мкл
Рабочий раствор йода300 мкл300 мкл

Опытные и контрольную пробы фотометрировать против дистиллированной воды при длине волны 630 – 690 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см. Активность альфы-амилазы выражается в единицах активности, которые определяются как:

Количество крахмала (мг), гидролизованного 1 л биологической жидкости за 1 сек инкубации.

Расчет активности альфы-амилазы в сыворотке/плазме крови проводить по формуле:

(мг/с х л) =(Екон-Ео/Екон) х С хt х К или (Екон-Ео/Екон) х 66,6

где Ео и Екон – экстинкция опытной и контрольной проб, измеренные относительно воды.

С – коэффициент пересчета на 1 мг крахмала, t – коэффициент пересчета на 1 секунду инкубации

К – коэффициент пересчета на 1 л жидкости.

При соблюдении приведенных в инструкциях соотношений ( С хt х К)=66,6

Нормальные величины: сыворотка/плазма – 3,3 – 8,9 мг/с х л

моча – до 44 мг/с х л

Источник: http://bioximia.narod.ru/index/0-50

Клинико-диагностическое значение определения активности амилазы сыворотки крови и мочи

Амилаза определение в биологических жидкостях диагностическое значение

У человека альфа-амилаза секретируется поджелудочной и слюнной железами, небольшая ее активность обнаруживается в тканях печени и скелетной мускулатуры.

Молекулярная масса альфа-амилазы относительно низка, в отличие от большинства ферментов она фильтруется в клубочках почек и содержится в моче. Альфа-амилаза состоит из двух изоферментов: панкреатического типа (Р – тип) и слюнного (S – тип).

У здоровых людей в сыворотке крови приходится около 70% амилолитической активности приходится на слюнной изофермент, в моче приблизительно такой же процент приходится на панкреатическую изоамилазу.

Гиперамилаземия и гиперамилазурия наблюдаются при многих заболеваниях, но наиболее выражены при остром панкреатите, при котором активность увеличивается в основном (до 90% и более) за счет панкреатического изофермента. При данном заболевании наибольший объем содержания амилазы в крови и моче отмечен в первые 1-3 сут. Гиперамилазурию панкреатического происхождения вызывают также вирусный гепатит, рак поджелудочной железы.

К гиперамилаземии непанкреатического происхождения относят поражение слюнных желез, почечную недостаточность. Причинами повышения б-амилазы в крови являются нарушение секреции желез, содержащих б-амилазу, недостаточность выделения почками амилазы из организма.

Гиперамилаземию вызывают многие фармакологические вещества, кортикостероидные препараты, салицилаты, тетрациклин, фуросемид, гистамин. Для б-амилазы крови характерны широкие внутри- и межиндивидуальные вариации. Наиболее информативным является определение панкреатической изоамилазы.

Изменение активности альфа-амилазы при патологии.

Определение активности альфа-амилазы приобретает клинико-диагностическое значение при диагностике и мониторинге заболеваний поджелудочной железы, пищеварительной системы, поражения органов брюшной полости.

В ряде случаев (например, при заболеваниях поджелудочной железы) диагностическое значение имеет активность только одного изофермента – панкреатической альфа-амилазы; при мониторинге заболеваний пищеварительного тракта необходимо проводить сравнение активности фермента в сыворотке (секреторная активность и дополнительное всасывание из органов брюшной полости) и моче (зачастую степень амилазурии является более стабильным и длительно сохраняющимся показателем, чем амилаземия).

Повышенные значения активности альфа-амилазы наблюдаются при:

Заболеваниях поджелудочной железы воспалительного характера (острый, отечный, хронический, реактивный панкреатит). Гиперамилаземия обычно носит острый (повышение в 10-40 раз), но зачастую кратковременный характер, гиперамилазурия также значительна, но уровень альфа-амилазы в моче снижается гораздо медленнее, чем в плазме (сыворотке) крови.

Это свойство удобно использовать при “запоздалом” диагностическом обследовании пациента с клиническими признаками панкреатита, однако для мониторинга течения процесса обычно измеряют активность фермента в обеих биологических жидкостях.

Следует отметить, что тяжелые формы поражения ПЖ с угрозой некроза тканей, а также панкреатит, сопровождающийся серьезными нарушениями липидного обмена, могут сопровождаться реальным или ложным (за счет ингибирования амилазы триацилглицеридами) снижением активности фермента.

Поэтому при подозрении на панкреатит любой формы диагностически важно не только определять активность альфа-амилазы в моче и сыворотке крови, но и рассчитывать амилазокреатининовый клиренс по формуле:

*100%.

При остром панкреатите эта расчетная величина превышает 6%. Расчет клиренса позволяет не делать поправку на объем и время сбора мочи и делает результат менее зависимым от используемых способов определения.

Заболеваниях органов брюшной полости, имеющих сходные симптомы с острым панкреатитом: остром аппендиците, перитоните, перфоративной язве желудка и двенадцатиперстной кишки.

Активность альфа-амилазы увеличивается примерно в 3-5, редко – в 10 раз, основной причиной гиперамилазиемии является не столько повышенная секреция фермента, сколько вторичное всасывание ее из органов брюшной полости в кровь.

Для дифференцирования диагноза проводят определение альфа-амилазы и креатинина в моче и расчет клиренса по креатинину с использованием приведенной выше формулы. При постоянном значении клиренса от 1 до 4 % следует заподозрить именно заболевания органов брюшной полости, маскирующихся под острый панкреатит.

По той же причине активность альфа-амилазы достоверно повышается при перфорации пищевода, гастрите, острой кишечной непроходимости, ишемии и инфаркте тонкой кишки, разрыве маточных труб, сальпингите, аневризме аорты.

При заболеваниях внутренних органов, не связанных напрямую со системой пищеварения, возможно умеренное повышение активности общей альфа-амилазы и/или ее изоферментов.

К таким заболеваниям относятся: холецистит, холелитиаз, поражение паренхимы почек и воспалительные заболевания этого органа, почечная недостаточность, простатит, диабетический кетоацидоз, метастазирование злокачественных опухолей в ткани и органы (в особенности, в легкие, поджелудочную железу, поперечно-ободочную кишку). При подозрении на описанные выше патологии проводят сравнительный анализ общей и панкреатической альфа-амилазы, поскольку при описанных заболеваниях в основном повышается активность селиварного изофермента (при онкологическом поражении ПЖ и поперечно-ободочной кишки повышается активность обоих – P- и S-изоферментов, что позволяет отличить его от воспалительных заболеваний тех же органов).

Гиперамилаземия непанкреатического происхождения возникает также при заболеваниях слюнных желез и некоторых патологиях мозга.

В этом случае повышение общей альфа-амилазной активности также возникает за счет увеличения активности слюнного изофермента и для дифференцирования диагноза следует провести параллельное измерение общей и панкреатической альфа-амилазы (при нормальной активности Р-амилазы можно заподозрить указанную выше патологию).

Сравнительный анализ активности альфа-амилазы в моче и сыворотке крови является также ценным диагностическим параметром при оценке патологии почек. При поражении функции почечного фильтра (при нефротическом синдроме, гломерулонефритах и др.

) активность альфа-амилазы в моче резко снижена, тогда как в крови отмечается умеренная или значительная гиперамилаземия, поэтому коэффициент “Амилаза сыворотки крови / амилаза мочи” является одним из основных диагностических параметров при данной патологии.

Послеоперационные состояния (системный воспалительный ответ на хирургическое вмешательство, развитие ОРДС и др.) также могут явиться причиной умеренной гиперамилаземии.

Понижение активности альфа-амилазы обычно сопутствует понижению функциональной активности поджелудочной железы, вызванной поражением паренхимы органа и/или нарушением экзокринной регуляции, и чаще всего возникает при:

Некротических изменениях в поджелудочной железе, связанных с гемморагическим панкреатитом и тотальным панкреонекрозом.

При заболеваниях печени (гепатиты, цирроз). Злокачественных опухолях, в особенности – при метастазировании печени.

Тяжелых нарушениях эндокринного баланса: гипотиреозе, сахарном диабете, гиперлипемии (особенно, с избытком триацилглицеридов, за счет ингибрования активного центра фермента), при общем расстройстве питания, кахексии, при токсикозе беременных.

В ряде случаев при описанных выше патологиях сывороточная активность альфа-амилазы может не снизиться, а остаться неизменной.

Основные соотношения при дифференциальной диагностике патологий со сходными симптомами.

Наиболее распространенные коэффициенты соотношений:

Общая альфа-амилаза /панкреатическая составляющая. Используется при дифференциальной диагностике воспалительных и злокачественных процессов в органах брюшной полости и некоторых других тканей.

При воспалительных процессах, не задевающих поджелудочную железу, основным источником активности общей альфа-амилазы является селиварный фермент, поэтому соотношение “Общая амилаза/панкреатическая изоформа” > 1.

При злокачественном поражении органов брюшной полости вклад обоих изоферментов примерно одинаков, и указанный коэффициент приблизительно равен 1,8-2,4. При вовлечении ПЖ в воспалительный процесс или при наличии в ней метастазов опухоли соотношение активности общей и панкреатической амилазы не превышает 1,5.

Общая альфа-амилаза/креатинин в моче и в сыворотке крови. Используется расчетный клиренс (формула приведена в пункте 3), позволяет дифференцировать воспалительный процесс в ПЖ (коэффициент превышает 6%) и органах брюшной полости (1-4%).

Общая альфа-амилаза сыворотки крови / Общая альфа-амилаза мочи. Используется при оценке функциональной активности почечного фильтра. При нефротическом синдроме и гломерулонефритах коэффициент выше 2-2,5.

Общая альфа-амилаза сыворотки крови / Триглицериды сыворотки крови. Соотношение носит “обратный” характер, поскольку избыток триацилглицеридов может ингибировать активность альфа-амилазы. Позволяет дифференцировать патологическое снижение продукции фермента и интерференцию с гиперипемией.

Общая альфа-амилаза сыворотки крови/ Панкреатическая липаза. Биологический и диагностический смысл коэффициента аналогичен таковому у предыдущего соотношения, поскольку наличие свободных триацилглицеридов в сыворотке крови напрямую связано с деятельностью панкреатической липазы. Пропорция прямая.

Изменение активности альфа-амилазы у практически здоровых людей. Интерференция с лекарственными препаратами.

Активность альфа-амилазы в плазме крови здоровых людей существенно зависит от характера питания и превалирующих в диете продуктов.

Кроме того, этот параметр сильно зависит от интенсивности обменных процессов у конкретного индивидуума, а также от мозговой активности обследуемого.

Поэтому активность фермента у одного и того же индивидуума в различные сроки (даже в течение одних и тех же суток) может варьировать в пределах 25-50% в обе стороны.

Гиперамилазиемия у здоровых людей может быть вызвана эмоциональным состоянием (стресс, усиление умственной активности), употреблением (даже однократным) алкоголя, а также связан с диетой, обогащенной белком и обедненной углеводами и сахарами. Гипоамилаземия возникает при увеличении утилизации глюкозы, при голодании, активной физической нагрузке, а также у людей с гиперлипидемией даже в отсутствие ее клинических проявлений.

При беременности сроком до 19 недель активность альфа-амилазы понижена в сравнении с нормой, в сроки до 33-34 недели беременности уровень активности повышается, а к 37-40 неделе стабилизируется на уровне, на 10-20% превышающем активность фермента у здоровых небеременных женщин.

На активность альфа-амилазы и ее панкреатического изофермента существенное влияние оказывает также применение целого ряда распространенных лекарственных препаратов, употребляемых практически здоровыми людьми при возникновении преходящих заболеваний инфекционного и воспалительного характера – например, антибиотиков тетрациклинового ряда, фуросемида, кортикостероидных противовоспалительных препаратов, салицилатов.

Также, значительное влияние на активность альфа-амилазы оказывают препараты, приводящие к сокращению сфинктера Одди, в том числе – гормоны (адреналин, гистамин, секретин), наркотические вещества (морфин, пантопон, опий, кодеин) и другие препараты, повышающие секрецию фермента и подавляющие отток секрета из поджелудочной железы.



Источник: http://biofile.ru/bio/21593.html

BioFine

Амилаза определение в биологических жидкостях диагностическое значение

Ответ.

У человека альфа-амилаза секретируется поджелудочной и слюнной железами, небольшая ее активность обнаруживается в тканях печени и скелетной мускулатуры. Молекулярная масса альфа-амилазы относительно низка, в отличие от большинства ферментов она фильтруется в клубочках почек и содержится в моче.

Альфа-амилаза состоит из двух изоферментов: панкреатического типа (Р – тип) и слюнного (S ? тип). У здоровых людей в сыворотке крови приходится около 70% амилолитической активности приходится на слюнной изофермент, в моче приблизительно такой же процент приходится на панкреатическую изоамилазу.

Гиперамилаземия и гиперамилазурия наблюдаются при многих заболеваниях, но наиболее выражены при остром панкреатите, при котором активность увеличивается в основном (до 90% и более) за счет панкреатического изофермента. При данном заболевании наибольший объем содержания амилазы в крови и моче отмечен в первые 1-3 сут. Гиперамилазурию панкреатического происхождения вызывают также вирусный гепатит, рак поджелудочной железы.

К гиперамилаземии непанкреатического происхождения относят поражение слюнных желез, почечную недостаточность. Причинами повышения α-амилазы в крови являются нарушение секреции желез, содержащих α-амилазу, недостаточность выделения почками амилазы из организма.

Гиперамилаземию вызывают многие фармакологические вещества, кортикостероидные препараты, салицилаты, тетрациклин, фуросемид, гистамин. Для α-амилазы крови характерны широкие внутри- и межиндивидуальные вариации. Наиболее информативным является определение панкреатической изоамилазы.

Изменение активности альфа-амилазы при патологии.

Определение активности альфа-амилазы приобретает клинико-диагностическое значение при диагностике и мониторинге заболеваний поджелудочной железы, пищеварительной системы, поражения органов брюшной полости.

В ряде случаев (например, при заболеваниях поджелудочной железы) диагностическое значение имеет активность только одного изофермента – панкреатической альфа-амилазы; при мониторинге заболеваний пищеварительного тракта необходимо проводить сравнение активности фермента в сыворотке (секреторная активность и дополнительное всасывание из органов брюшной полости) и моче (зачастую степень амилазурии является более стабильным и длительно сохраняющимся показателем, чем амилаземия).

Повышенные значения активности альфа-амилазы наблюдаются при:

Заболеваниях поджелудочной железы воспалительного характера (острый, отечный, хронический, реактивный панкреатит). Гиперамилаземия обычно носит острый (повышение в 10-40 раз), но зачастую кратковременный характер, гиперамилазурия также значительна, но уровень альфа-амилазы в моче снижается гораздо медленнее, чем в плазме (сыворотке) крови.

Это свойство удобно использовать при “запоздалом” диагностическом обследовании пациента с клиническими признаками панкреатита, однако для мониторинга течения процесса обычно измеряют активность фермента в обеих биологических жидкостях.

Следует отметить, что тяжелые формы поражения ПЖ с угрозой некроза тканей, а также панкреатит, сопровождающийся серьезными нарушениями липидного обмена, могут сопровождаться реальным или ложным (за счет ингибирования амилазы триацилглицеридами) снижением активности фермента.

Поэтому при подозрении на панкреатит любой формы диагностически важно не только определять активность альфа-амилазы в моче и сыворотке крови, но и рассчитывать амилазокреатининовый клиренс по формуле:

Также смотрите:

Закон единообразия гибридов первого поколения (первый закон Менделя)
Данный закон утверждает, что скрещивание особей, различающихся по данному признаку (гомозиготных по разным аллелям), дает генетически однородное потомство (поколение F 1), все особи которого гетерозиготны. Все гибриды F 1 могут иметь при этом либо фенотип одного из ро …

Экономические аспектыю Причиняемый вред
Некоторые водоросли наносят экономический ущерб или по крайней мере доставляют большие неприятности. Они загрязняют источники воды, часто придавая ей неприятный вкус и запах. Некоторые массово размножившиеся виды вполне можно идентифицировать по специфическому для них …

Статические и кинестетические ощущения
а) Статические ощущения: Показания о состоянии нашего тела в пространстве, его позы, его пассивных и активных движений, равно как и движений и отдельных частей тела относительно друг друга, дают многообразные ощущения по преимуществу от внутренних органов, от мышечно …

Источник: http://www.biofine.ru/bfins-1096-1.html

Количественное определение активности амилазы мочи по Вольгемуту

Амилаза определение в биологических жидкостях диагностическое значение

Количественное определение активности амилазы мочи по Вольгемуту

ПРИНЦИП МЕТОДА: Определение активности амилазы в биологических жидкостях (моча, ликвор, слюна, сыворотка крови) основано на определении минимальной активности (количества) фермента, катализирующего в стандартных условиях гидролиз добавленного крахмала. Амилазная активность мочи выражается количеством мл крахмала, которое расщепляется ферментом, содержащимся в 1 мл неразведенной мочи, при температуре 45ºC за 15 минут.

Расчет: Предположим, что полный гидролиз крахмала произошел в первых 4-х пробирках. В четвертой пробирке (где разведение мочи 1:16), 1/16 мл мочи гидролизует 2 мл 0,1% крахмала, значит 1 мл неразведенной мочи расщепит 32 мл 0,1% крахмала. Следовательно, активность амилазы мочи равна 32 единицы. В норме активность амилазы мочи равна 16-64 единицы.

Клинико-диагностическое значение.

Определение активности амилазы мочи и сыворотки крови широко используется в клинической практике для диагностики заболеваний поджелудочной железы.

При острых панкреатитах амилазная активность мочи и сыворотки крови увеличивается в десятки раз, особенно в первые сутки заболевания, а затем постепенно возвращается к норме. При почечной недостаточности амилаза в моче отсутствует.

В детском возрасте увеличение активности амилазы наблюдается при эндемическом паротите, что указывает на одновременное поражение поджелудочной железы вирусом паротита.

Определение концентрации глюкозы в слюне энзиматическим(А) и колориметрическим(Б) методом

А.)

окисление глюкозы до глюкуроновой кислоты с помощью фермента глюкозооксидазы и образовании в ходе реакции перекиси водорода.Перекись+субстрат+фер-т пероксидаза= окрашенный продукт.

С(оп.)= Е(оп.)/ Е(ст.) х С (ст.) С(ст.)=5, 55 ммоль/л Е(ст.)=0,156 ммоль/л

Б.)

Гл +о-толуидин = синезелен.окр-е, интренсивность кот. Прямо пропроц. Конц-ии Гл и определяется в фотоколориметре.

Формула расчета та же

Клиника

Уменьшение конц-ии Гл-поражениея паренхимы печени, нар-е ферм.акт-ти при распаде гликогена, гипофункция щитовидной, надпочечников, гипофиза, передозировка инсулина у больных сах. Диабетом, нар-я всас-я углеводов, при потерях крови.

Норма: 3 3-5, 5 ммоль/л

Эмульгирование жира

ПРИНЦИП МЕТОДА: Эмульгирование жира различными амфифильными веществами происходит благодаря их адсорбции на границе раздела двух фаз – гидрофобной и гидрофильной.

В эмульсиях может происходить два явления – коагуляция и коалесценция.

Коагуляция – объединение частиц дисперсной фазы в агрегаты вследствие сцепления (адгезия) частиц при их соударении.

Соударения происходят в результате броуновского движения, а также седиментации, перемещения частиц в электрическом поле.

Характерные признаки коагуляции: увеличение мутности, появление хлопьевидных образований – флоккул, расслоение исходно устойчивой к седиментации системы с выделением дисперсной фазы в виде коагулянта.

Коалесценция – слияние капель жидкости внутри другой жидкости. В результате коалесценции происходит уменьшение степени дисперсности эмульсий, пен, аэрозолей вплоть до их расслоения на две фазы (жидкость – жидкость или жидкость – газ).

Коалесценция происходит в результате флуктуции порыва пленок подвижной среды, разделяющих жидкие и газообразные частицы, что является причиной широкого разброса в значениях времени пленок, характеризующего устойчивость частиц коалесценции.

В результате коагуляции происходит слипание жировых частиц. При размешивании соединившиеся частицы легко разъединяются дисперсионной средой с восстановлением эмульсии, поэтому коагуляция не вызывает разрушения эмульсий с выделением исходных фаз.

При коалесценции капелек, наступающей при разрушении адсорбционных слоев, эмульсии необратимо разрушаются.

Роль эмульгаторов при образовании эмульсий в основном сводится к следующему: они способствуют снижению межфазной энергии и предохраняют диспергированные капельки при их сближении от слияния.

Анализ желудочного сока

.

Sin a

n =¾¾¾¾,

Sin b

который в сыворотке крови обусловлен в основном количеством, качеством растворенного белка и температурой. Влияние других компонентам сыворотки крови на коэффициент преломления значительно меньше. Определение коэффициента преломления проводят с помощью рефрактометров.

РАСЧЕТ: Определив показатель преломления по таблице, вычисляют процент содержания белка в сыворотке крови, для перехода к единицам системы СИ (г/л), результат следует умножить на 10.

НОРМА: содержание общего белка в плазме (сыворотке) крови здорового человека составляет 6.5-8.5 % или 65-85 г/л.

ПРИНЦИП МЕТОДА

Тест основан на реакции креатинина с пикратом натрия, как описано Яффе. Креатинин реагирует с

щелочным пикратом, формируя красный комплекс. Для измерения выбирается временной интервал с

отсутствием влияния других компонентов сыворотки. Изменение оптической плотности образующегося

комплекса пропорционально концентрации креатинина в пробе.

КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

Креатинин является результатом разрушения креатина, компонента мышц, который может трансформироваться в АТФ, она является источником энергии для клеток. Продукция креатинина зависит

от объема мышечной массы, варьирует незначительно, и уровни обычно очень стабильны.

Креатинин выделяется почками. С развитием почечной недостаточности происходит накопление в

крови мочевины, креатинина и мочевой кислоты. Повышение уровня креатинина может означать почечную

недостаточность. Клинический диагноз не должен ставиться по результатам одного теста,

он должен базироваться на совокупности клинических и других лабораторных данных.

Повышение значений: Физическая нагрузка. Акромегалия, гигантизм.Сахарный диабет. Инфекции.Гипотиреоз. Мясная пища. Увеличенный сердечный выброс. Беременность.Ожоги.Отравление окисью углерода.Белковая диета. Повышенный метаболизм. Анемии.

Снижение значений: Гипертиреоз. Анемии. Паралич, мышечная дистрофия, заболевания с уменьшением мышечной массы (например, нейрогенная атрофия, полимиозит и т.п.). Воспалительные и метаболические заболевания с вовлечением мышц. Развернутая стадия заболеваний почек. Лейкоз.Вегетарианская пища. Креатинин снижается в моче, оттекающей от почки со стороны стеноза почечной артерии.

Нормы

Женщины: 5,3-15,9ммоль/сут

Мужчины: 7,1-17,7 ммоль/сут

Количественное определение активности амилазы мочи по Вольгемуту

ПРИНЦИП МЕТОДА: Определение активности амилазы в биологических жидкостях (моча, ликвор, слюна, сыворотка крови) основано на определении минимальной активности (количества) фермента, катализирующего в стандартных условиях гидролиз добавленного крахмала. Амилазная активность мочи выражается количеством мл крахмала, которое расщепляется ферментом, содержащимся в 1 мл неразведенной мочи, при температуре 45ºC за 15 минут.

Расчет: Предположим, что полный гидролиз крахмала произошел в первых 4-х пробирках. В четвертой пробирке (где разведение мочи 1:16), 1/16 мл мочи гидролизует 2 мл 0,1% крахмала, значит 1 мл неразведенной мочи расщепит 32 мл 0,1% крахмала. Следовательно, активность амилазы мочи равна 32 единицы. В норме активность амилазы мочи равна 16-64 единицы.



Источник: https://infopedia.su/16x74a4.html

Амилаза

Амилаза определение в биологических жидкостях диагностическое значение

α‑Амилаза (диастаза, 1,4‑a‑D‑глюкангидролаза, КФ 3.2.1.1.) катализирует гидролиз α‑1,4‑глюкозидных связей крахмала, гликогена и родственных им полисахаридов до мальтозы, декстринов и других полимеров. Молекулярная масса фермента около 48000 Д.

В состав молекулы входит атом кальция, который не только активирует фермент, но и защищает его от действия протеиназ, активность амилазы возрастает при влиянии ионов хлора. В крови она представлена двумя изоферментами: панкреатическим — P‑тип и слюнным — S‑тип, каждый из которых делится на несколько фракций.

Изофермент S‑типа составляет в целом 45‑70% (в среднем 57%), остальное приходится на долю P‑типа. Оба изофермента имеют почти идентичные каталитические и иммунологические свойства, незначительно отличаются по электрофоретической подвижности, но хорошо разделяются при гель‑фильтрации на ДЭАЭ‑сефадексе.

Существует также макроамилаза, которая не выделяется почками, но может встречаться в сыворотке крови в норме (около 1 % здоровых людей) и патологии (2,5 %).

Высокая активность амилазы наблюдается в околоушной и поджелудочной железах.

Вместе с тем, ее активность, хотя и намного ниже, обнаруживается в толстом и тонком кишечнике, скелетных мышцах, печени, почках, легких, фаллопиевых трубах, жировой ткани.

В крови фермент связан как с белками плазмы крови, так и с форменными элементами. Активность фермента одинакова у мужчин и у женщин и не зависит от характера принимаемой пищи и времени суток.

Существующие методы изучения активности a‑амилазы в биологических жидкостях делятся на две большие группы:

1. Сахарифицирующие (редуктометрические), основанные на исследовании образующихся из крахмала сахаров по редуцирующему действию глюкозы и мальтозы.

2. Амилокластические, базирующиеся на определении остатка нерасщепленного крахмала:

  • по степени интенсивности его реакции с йодом. Эти методы более чувствительны и специфичны, но точность их во многом зависит от качества крахмала и оптимизации условий определения.
  • по вязкости суспензии крахмала, не отличаются высокой точностью и сейчас не применяются.

3. Методы с применением хромогенных субстратов –– основаны на использовании комплексов субстрат‑краситель, которые под действием α‑амилазы распадаются с образованием водорастворимого красителя.

4. Методы, основанные на сопряженных ферментативных реакциях:

Крахмал + Н2О  Мальтоза + Мальтотриоза + Декстрин

Мальтоза + Н2О  2 Глюкоза

Глюкоза + АТФ  Глюкозо‑6‑Ф + АТФ

Глюкозо‑6‑Ф+НАДФ  Глюконат‑6‑Ф + НАДФН

Активность фермента устанавливается по скорости накопления НАДФН.

В качестве унифицированных утверждены два амилокластических метода: Каравея (со стойким крахмальным субстратом) и Смита‑Роэ.

Принцип

α‑Амилаза катализирует гидролиз нерастворимого цветного крахмального субстрата с образованием синего, растворимого в воде красителя. Количество освобожденного красителя пропорционально каталитической активности фермента.

Нормальные величины

Сывороткауказанный метод2,3‑5,8 мккат/л
по Каравею12‑32 мг/с·л
по Смиту‑Рое4,4‑8,3 мг/с·л
У новорожденных значения активности ниже в 2‑5 раз.
Мочауказанный метод16,6‑33,3 мккат/л
по Каравею или Смиту‑Рое < 44 мг/с·л
Дуоденальное содержимоепо Каравею1,7‑4,4 г/с·л

Влияющие факторы

Завышение результатов наблюдается при стрессовых состояниях, при сокращении сфинктера Одди под воздействием, например, наркотических анальгетиков, сниженные результаты получаются при использовании оксалата и цитрата.

Клинико‑диагностическое значение

Повышение активности фермента происходит главным образом при заболеваниях поджелудочной железы. При остром панкреатите активность в крови и моче возрастает в 10‑30 раз. Гиперамилаземия наступает в начале заболевания, достигает максимума к 12‑24 ч, затем снижается и приходит к норме на 2‑6 день.

Однако при тотальном панкреонекрозе может не отмечаться повышение активности амилазы. Возрастание активности фермента выявляется при беременности, почечной недостаточности, кишечной непроходимости, заболеваниях желчных путей, диабетическом кетоацидозе, некоторых опухолях легких и яичников, поражении слюнных желез.

Выявление повышенного количества изоферментов P‑ или S‑типа не патогномонично для какого‑либо заболевания.

Низкие уровни фермента в сыворотке крови не имеют существенного значения. 

Источник: https://biokhimija.ru/enzymes/amilase.html

Терапевт Шубин
Добавить комментарий